Proteínas
Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos.
Por sus propiedades
físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples (holoproteidos), formadas solo por aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), formadas por aminoácidos acompañados de
sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por
desnaturalización y
desdoblamiento de las anteriores.
Extraer la caseína de la leche y reconocer su naturaleza proteica.PROTEÍNAS I (ensayos de reconocimiento de proteínas)
Objetivo:
Materiales y sustancias:
- Vaso de bohemia
- Varilla de vidrio
- Mechero
- Soporte
- Tela metálica
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Termómetro
- Papel de filtro
- Leche descremada
- Ácido etanoico 2,0 M
- Hidróxido de sodio al 10%
- Sulfato cúprico al 1%
- Ácido nítrico concentrado
Biuret
La presencia
de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret.
El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina e identifica la presencia de enlaces peptídicos . La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta,
debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm. Xantoproteico
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. EXTRACCIÓN:
Colocar 25mL de leche descremada en un vaso de bohemia.Calentar hasta aproximadamente 40ºC agitando con varilla de vidrio.
Adicionar ácido etanoico 2,0 M (gota a gota) agitando en forma continua hasta coagulación total.
Separar el coágulo de caseína del suero mediante filtración.
Sacar con papel de filtro la caseína.
Separar 2 porciones del sodio obtenido de aproximadamente 1cm³ y colocar en dos tubos de ensayo.
CARACTERIZACIÓN:
Reacción de Biuret: agregar sobre la caseína 20 gotas de NaOH al 10%. Luego agregar 2 gotas de CuSO al 1%.
Reación xantoproteica: agregar sobre la caseína (del otro tubo) 10 gotas de HNO3 concentrado.
Los ensayos de biuret y xantoproteico permiten determinar el carácter proteico de la caseina. El ensayo de biuret muestra presencia de enlaces peptidicos y el xantoproteico la de restos aromaticos, en particular el grupo fenólico de la tirosina.
TUBO
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ENSAYO
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OBSERVACIONES
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1
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Biuret
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Cambia el color a
violeta (+)
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2
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Xantoproteico
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Cambia el color a
amarillo (+)
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Tanto la reacción del Biuret como el del Xantoproteico dieron positivas.
El Biuret, tomó un color violeta intenso, lo que determina la presencia de proteínas. Mientras el Xantoproteico se vovióamarillo, lo que determina la presencia de aminoácidos portadores de grupos aromáticos.
También fue realizado el procedimiento de caracterización con muestras de caseína, gelatina, ovoalbúmina, aspartamo, glicina y proteína de suero.
CASEÍNA:
La caseína es una fosfoproteína (un tipo de heteroproteína) presente en la leche y en algunos de sus derivados. En la leche, se encuentra en la fase soluble asociada al calcio (fosfato de calcio) en un complejo que se ha denominado caseinógeno.GELATINA:
La gelatina es una proteína compleja, un polímero compuesto por aminoácidos. Una notable propiedad de las disoluciones de esta molécula es su comportamiento frente a temperaturas diferentes: son líquidas en agua caliente y se solidifican en agua fría.OVOALBÚMINA:
La albumina es una sustancia orgánica nitrogenada, viscosa, soluble en agua, coagulable por el calor, contenida en la clara de huevo. La clara o también conocida como albumen, tiene un 88 por ciento de agua y el resto esta constituido básicamente por proteínas de la clara siendo la principal la ovoalbúmina, que representa el 54 por ciento del total proteico.
ASPARTAMO:
GLICINA:
Es el aminoácido más pequeño y el único no quiral de los 20 aminoácidos presentes en la célula.
Muestra
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Biuret
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Xantoproteico
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Caseína
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+
|
+
|
Gelatina
|
+
|
-
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Ovoalbúmina
|
+
|
+
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Aspartamo
|
-
|
-
|
Glicina
|
-
|
-
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Proteína
de suero
|
+
|
+
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PROTEÍNAS II:
Diálisis:
La diálisis es en método que se usa para separar las
moléculas de dos líquidos con diferente concentración,
que están separados por una membrana semipermeable. La solución
que esta mas concentrada es la que atraviesa la membrana para diluirse con la
otra que es menos concentrada y de esta manera ambas concentraciones quedan con
la misma concentración.
Materiales:
- Dializador
- Vaso de bohemia
- NaCl
- AgNO3 (Nitrato de plata)
- NaOH al 10%
- CuSo4 al 1%
Para investigar la presencia de Cl- utilizamos como reactivo el Nitrato de Plata (AgNo3) :
AgNO3 —H2O→ Ag+(ac) + NO3-(ac)
CATIÓN PLATA ANIÓN NITRATO
NaCl —H2O→ Na+(ac)+ Cl-(ac)
CATIÓN SODIO ANIÓN CLORURO
Al reaccionar:
CLORURO DE PLATA (Precipitado blanco)
Biuret:
El interior dio positivo y el exterior negativo, esto quiere decir que hay proteínas sólo en la parte interna.
Nitrato de plata (AgNO3):
Tanto el interior como el exterior da positivo, Estoy quiere decir que hay cloruro en las dos soluciones
MUESTRA
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Reacción con AgNO3
|
Agua
destilada
|
Queda igual
|
Agua potable
|
Se vuelve
turbia
|
NaCl
(solución)
|
Precipitado blanco
|
CONCLUSIONES:
- Con el agua destilada el AgNO3 no reacciona.
- El agua potable al reaccionar con el AgNO3 se vuelve turbia.
- La solución NaCl al reaccionar con el AgNO3 se vuelve blanca.
El agua destilada no presenta sales, a diferencia del NaCl que sí las tiene y del agua potable que también las tiene (en mayor cantidad que el NaCl).
Procedimiento de caracterización con las reacciones Biuret y Nitrato de Pata:
MUESTRA
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Biuret
|
AgNo3
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| Interior |
+
|
+
|
Exterior
|
-
|
+
|
Biuret:
El interior dio positivo y el exterior negativo, esto quiere decir que hay proteínas sólo en la parte interna.
Nitrato de plata (AgNO3):
Tanto el interior como el exterior da positivo, Estoy quiere decir que hay cloruro en las dos soluciones
